Two-dimensional 1H and 15N NMR titration studies of hisactophilin

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Abstract

We have used two-dimensional 1H-15N heteronuclear single quantum correlation spectroscopy to measure the pH dependence of backbone amide group chemical shifts in the actin binding protein hisactophilin over the pH range 5.7-11.1. Most of the resonances can be analyzed using a simple equation involving a single apparent ionization constant, pKapp. The majority of resonances in the protein titrate with pKapp values of 5.6-7.4. The results can be rationalized in terms of titration of many histidine residues in hisactophilin. The titration data provide direct experimental support for the proposed models of the atomic basis of actin and membrane binding by hisactophilin.

Nous avons utilisé la spectroscopie bidimensionnelle de corrélation d'un seul quantum hétéronucléaire de 1H et 15N pour mesurer les déplacements chimiques des amides du squelette de l'hisactophiline, une protéine liant l'actine, en fonction du pH, de 5,7 à 11,1. La plupart des résonances peuvent être analysées en utilisant une équation simple comprenant une seule constante d'ionisation apparente, pKapp. La majorité des résonances de la protéine sont titrées et ont un pKapp entre 5,6 et 7,4. Ces résultats peuvent s'expliquer par la titration des nombreux résidus histidine de l'hisactophiline. Les données de la titration apportent un appui expérimental direct aux modèles atomiques proposés pour la liaison de l'actine à la membrane par l'intermédiaire de l'hisactophiline. [Traduit par la Rédaction]

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