Stability of mutations in a Sphingomonas strain

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Abstract

Sphingomonas sp. strain RW1 is able to mineralise dibenzofuran and dibenzo-p-dioxin. Three mutants were constructed that could not use dibenzofuran or dibenzo-p-dioxin as a carbon source but were able to grow with the succeeding metabolites of the pathway. Two different mutagenic agents were applied, a chemical treatment with 1-methyl-3-nitro-1-nitrosoguanidine, resulting in mutants RW1-N6 and RW1-N7, and a biological insertion mutagenesis with the mini-Tn5 transposon pBSL118, resulting in mutant RW1-M3. Southern blot analysis and PCR experiments confirmed a single insertion of the mini-Tn5 into one of the genes coding for the oxygenase component of the dibenzofuran 4,4a-dioxygenase system. The genetic stability of these mutants was examined after growth with complex medium under nonselective conditions. All three mutants failed to revert to wild-type metabolic functions.

Le Sphingomonas sp. souche RW1 est capable deminéraliser le dibenzofurane et la dibenzo-p-dioxine. Nous avons construit trois mutants qui ne pouvaient pas utiliser le dibenzofurane ou la dibenzo-p-dioxine comme source de carbone mais qui étaient capables de pousser en présence de métabolites qui apparaissent dans la suite du sentier. Deux traitements mutagènes différents ont permis d'obtenir ces mutants soit, un traitement chimique avec la 1-méthyl-3-nitro-1-nitrosoguanidine pour les mutants RW1-N6 et RW1-N7, et la mutagénèse par insertion biologique avec le transposonmini-Tn5 pBSL118 pour le mutant RW1-M3. Le buvardage Southern et des essais en PCR ont confirmé une seule insertion dumini-Tn5 dans un des gènes codant le composé oxygénase dans le système dibenzofurane 4,4a-dioxygénase. La stabilité génétique de ces mutants a été vérifiée après croissance dans des milieux complexes dans des conditions non sélectives. Aucun des mutants n'a montré de réversion aux fonctions métaboliques du type sauvage. [Traduit par la Rédaction]

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