Minimising invasiveness in diagnostics: developing a rapid urine-based monoclonal antibody dipstick test for malaria: U.S. Markakpo et al.

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Abstract

Objective

To generate monoclonal antibodies (MAbs) for developing a rapid malaria diagnostic urine-based assay (RUBDA), using Plasmodium-infected human urinary antigens.

Methods

Plasmodium-infected human urinary (PAgHU) and cultured parasite (CPfAg) antigens were used to generate mouse MAbs. The reactivity and accuracy of the MAbs produced were then evaluated using microplate ELISA, SDS-PAGE, Western blotting assay, microscopy and immunochromatographic tests.

Results

Ninety-six MAb clones were generated, of which 68.8% reacted to both PAgHU and CPfAg, 31.3% reacted to PAgHU only, and none reacted to CPfAg only. One promising MAb (UCP4W7) reacted in WBA, to both PAgHU and CPfAg, but not to Plasmodium-negative human urine and blood, Schistosoma haematobium and S. mansoni antigens nor measles and poliomyelitis vaccines.

Conclusion

MAb UCP4W7 seems promising for diagnosing Plasmodium infection. Urine is a reliable biomarker source for developing non-invasive malaria diagnostic tests. SDS-PAGE and MAb-based WBA appear explorable in assays for detecting different levels of Plasmodium parasitaemia.

Objectif

Générer des anticorps monoclonaux (MAb) pour développer un test rapide de diagnostic du paludisme basé sur l'urine (RUBDA), en utilisant des antigènes urinaires humains infectés par Plasmodium.

Méthodes

Des antigènes d'urines humaines infectées par Plasmodium (PAgHU) et provenant de parasites cultivés (CPfAg) ont été utilisés pour générer des MAb de souris. La réactivité et la précision des MAb produits ont ensuite été évaluées à l'aide de microplaques ELISA, du SDS-PAGE, de l'analyse Western Blot, de la microscopie et de tests immunochromatographiques.

Résultats

96 clones de MAb ont été générés, dont 68,8% ont réagi à la fois avec PAgHU et CPfAg, 31,3% ont réagi avec PAgHU uniquement et aucun n'a réagi avec CPfAg uniquement. Un MAb prometteur (UCP4W7) a réagi avec du sang total, à la fois avec PAgHU et CPfAg, mais pas avec de l'urine et du sang humain négatifs pour Plasmodium, ni avec des antigènes de Schistosoma haematobium et S. mansoni, ni avec des vaccins contre la rougeole et la poliomyélite.

Conclusion

Le MAb UCP4W7 semble prometteur pour le diagnostic de l'infection par Plasmodium. L'urine est une source fiable de biomarqueurs pour le développement de tests de diagnostic non invasifs pour le paludisme. Les tests SDS-PAGE et le sang total basé sur des anticorps monoclonaux apparaissent explorables pour détecter des niveaux différents de parasitémie à Plasmodium.

Objetivo

Generar anticuerpos monoclonales (AcsMs) para desarrollar una prueba de diagnóstico rápido de malaria con orina (PDRMO), utilizando antígenos urinarios de humanos infectados con Plasmodium.

Métodos

Se utilizaron antígenos urinarios de humanos infectados con Plasmodium (AgUHP) y de parásitos cultivados (AgPfC) para generar AcsMs de ratón. La reactividad y precisión de los AcsMs producidos se evaluaron utilizando las técnicas de ELISA, SDS-PAGE, ensayo de Western blot, microscopía e inmunocromatografía.

Resultados

Se generaron 96 clones de AcsM, de los cuales un 68.8% reaccionaban tanto a AgUHP como a AgPfC. Un 31.3% reaccionaban solo a AgUHP y ninguno reaccionaba solo a AgPfC. Un AcM prometedor (UCP4W7) reaccionó en un análisis de Western blot (AWB) a ambos AgUHP y AgPfC, pero no a orina y sangre Plasmodium-negativos, antígenos de Schistosoma haematobium y S. mansoni o vacunas de sarampión y poliomielitis.

Conclusión

AcM UCP4W7 parece prometedor para el diagnóstico de la infección por Plasmodium. La orina es una fuente confiable de biomarcadores para desarrollar pruebas diagnósticas no invasivas de malaria. Los AWB con SDS-PAGE y AcsM aparentemente son ensayos que podrían explorarse para detectar diferentes niveles de parasitemia por Plasmodium.

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